展示在噬菌體表面的隨機肽庫可應(yīng)用于許多方面，包括繪制抗原表位圖譜、研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用和鑒定非肽配體的肽模擬型。生物活性肽分子的鑒定可以通過對固定在平板上的純化受體進行淘選，也可以在完整細(xì)胞上進行淘選。蛋白酶底物的鑒定可通過在隨機肽區(qū)域的上游加一段親和tag，然后選用特異性的介質(zhì)來區(qū)分切割和未切割的噬菌體。另外大的蛋白質(zhì)分子如：抗體、激素、蛋白酶抑制劑、酶和結(jié)合蛋白也可展示在噬菌體上，通過對隨機突變文庫的
噬菌體篩選，分離出各種具有親和力或特異性改變的變異株。
只有當(dāng)噬菌體的感染復(fù)度MOI值遠(yuǎn)低于1時（即細(xì)胞過量時），噬菌斑的數(shù)量才會隨著加入噬菌體的量而呈線性增加。正因如此，建議檢測噬菌體貯液的滴度時，在感染前進行稀釋，而不是在高MOI值的情況下稀釋被感染的細(xì)胞。低MOI值有助于確保每個噬菌斑僅含一個DNA序列。
1.接種單菌落于5-10 ml LB培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)至對數(shù)中期。
2.細(xì)胞生長時，微波爐融化上層瓊脂，分成3 ml等份于滅菌試管中，每個噬菌體稀釋度一管。保存于45℃?zhèn)溆谩?/div>
3.37℃預(yù)溫平板，每個噬菌體稀釋度取一個平板備用。
4.在LB中準(zhǔn)備10倍系列稀釋的噬菌體。
建議稀釋范圍擴增的噬菌體培養(yǎng)物上清10-10；未擴增的淘選洗脫物10-10。每個稀釋度換一新鮮吸頭，建議使用帶濾芯吸頭以避免交叉污染。
5.當(dāng)菌體培養(yǎng)物達對數(shù)中期，分成200μl等份于微量離心管中，每個噬菌體稀釋度一管。
6.每管加入10μl不同稀釋度的噬菌體，快速震蕩混勻，室溫溫育1-5 min。
7.將感染細(xì)胞加入45℃預(yù)溫的上層瓊脂培養(yǎng)管中，每次一管，快速混勻，立即傾注于37℃預(yù)溫的平板上。適當(dāng)傾斜平板將上層瓊脂均勻鋪開。
8.待平板冷卻5 min后，倒置于37℃培養(yǎng)過夜。
9.檢查平板，計數(shù)有~10個噬菌斑的平板上的斑數(shù)。然后用此數(shù)目乘以稀釋因子即得到每10μl噬菌體的空斑形成單位（pfu）滴度。
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更新時間：2020-12-09
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