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膠體金檢測原理

更新時間:2023-05-05點擊次數:1514

膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金顆粒,并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態,形成帶負電的疏水膠溶液,由于靜電作用而成為穩定的膠體狀態,故稱膠體金。膠體金在弱堿環境下帶負電荷,可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合,由于這種結合是靜電結合,所以不影響蛋白質的生物特性。

膠體金除了與蛋白質結合以外,還可以與許多其它生物大分子結合,如SPA、PHAConA等。根據膠體金的一些物理性狀,如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應,加上結合物的免疫和生物學特性,因而使膠體金廣泛地應用于免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域。

膠體金標記,實質上是蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機理可能是膠體金顆粒表面負電荷,與蛋白質的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對蛋白質有很強的吸附功能,可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價結合,因而在基礎研究和臨床實驗中成為非常有用的工具。

免疫金標記技術(Immunogold labelling techique) 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性,在金標蛋白結合處,在顯微鏡下可見黑褐色顆粒,當這些標記物在相應的配體處大量聚集時,肉眼可見紅色或粉紅色斑點,因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中,這一反應也可以通過銀顆粒的沉積被放大,稱之為免疫金銀染色。

膠體金免疫層析測試卡的結構,由樣品墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊構成。其中,膠體金顆粒上修飾有檢測抗體,硝酸纖維素膜上有檢測線和控制線。檢測時,被測樣本在毛細作用下通過膠體金標記的抗體,形成抗原抗體膠體金復合物,復合物繼續爬行,通過包被有捕捉抗體的檢測線,形成雙抗體夾心膠體金復合物,在檢測線處呈現色帶。過量的膠體金抗體流過檢測線,在之后的控制線上形成膠體金免疫復合物,呈現色帶。需要注意的是,控制線上色帶的形成與被檢測物質的存在與否無關,即使樣本里沒有被檢測的物質,控制線也會顯現。這種捕捉抗體-抗原-檢測抗體-膠體金納米顆粒標記"復合結構被稱為雙抗體夾心結構,膠體金為指示標記。最典型的產品是“早早孕"試紙條,采用雙抗體夾心一步法技術,以膠體金為指示標記檢測尿液中的人絨毛膜促性腺激素(Human Choionic Gonadotophin,HCG)濃度,以判斷受檢者是否受孕。

 


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